Качественный анализ аминокислотных смесей методом бумажной хроматографии.

Работа 1. Анализ аминокислот и белков

II. ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ

Глюкозурия

Глюкозурияявляется результатом нарушения углеводного обмена вследствие патологических изменений в поджелудочной железе (сахарный диабет, острый панкреатит и т.д.).

При тяжелых формах сахарного диабета содержание глюкозы в моче может достигать 8-10%. Осмотическое давление мочи повышается. Суточный диурез возрастает до 5-10 л и более (полиурия). Развивается обезвоживание организма и как следствие его - усиленная жажда (полидипсия).

Реже встречается глюкозурия почечного происхождения, связанная с недостаточностью резорбции глюкозы в почечных канальцах.

Как временное явление глюкозурия может возникнуть при некоторых острых инфекционных и нервных заболеваниях, после приступов эпилепсии, сотрясения мозга.

Отравления морфином, стрихнином, хлороформом, фосфором также обычно сопровождаются глюкозурией.

Может быть глюкозурия алиментарного происхождения, глюкозурия беременных и глюкозурия при нервных стрессовых состояниях (эмоциональная глюкозурия).

Контрольные вопросы

1. Перечислите основные пищевые источники углеводов. Какова суточная потребность в углеводах у взрослого человека?

2. Охарактеризуйте процесс переваривания и всасывания углеводов в пищеварительном тракте.

3. Приведите схему синтеза гликогена из глюкозы, перечислите ферменты, участвующие в этом процессе.

4. Рассмотрите механизм фосфоролитического расщепления гликогена. Какова роль гликогена в поддержании гомеостаза глюкозы?

5. Каковы основные этапы гликолиза? В чем сходство и различие между аэробным и анаэробным гликолизом?

6. Какова энергетическая ценность распада глюкозы в аэробных условиях?

7. Какие реакции включает цикл Кори? В чем его биохимическая функция?

8. В чем сходство и различие гликолиза и брожения?

9. Что понимают под гликонеогенезом? Каковы основные стадии этого процесса?

10. Как функционируют глицеролфосфатный челночный механизм и малат-аспартатная челночная система?

11. Каковы особенности обмена фруктозы и галактозы?

12. Какие гормоны участвуют в регуляции гомеостаза глюкозы?

13. Каков химизм пентозофосфатного пути обмена глюкозы?

14. Какова биологическая роль образующихся восстановленных форм НАДФ?

15. Перечислите известные Вам нарушения обмена углеводов.

16. В чем могут быть причины возникновения гипергликемии и гипогликемии?

Разметить хроматографическую пластинку, как показано на рис. 1. В точки 1, 2, 3 наносят капилляром растворы аминокислот, в точку 3 – раствор смеси аминокислот. Хроматограмму подсушивают над теплой плиткой.

Для проявления хроматограмму помещают в хроматографический сосуд, на дно которого налита смесь бутанола, уксусной кислоты и воды (15:3:7) так, чтобы растворитель не доходил до линии старта. Сосуд закрывают крышкой и оставляют хроматограмму на время, за которое проявитель пройдет путь снизу вверх. Хроматограмму вынимают из сосуда, отмечают границу фронта проявителя и высушивают. На высушенную хроматограмму наносят в спрей-камере при помощи пульверизатора 0,5%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Когда ацетон испарится, хроматограмму помещают на термостолик при 70°С на 15 мин. Позиции аминокислот на хроматограмме выявляются в виде фиолетовых пятен.

Рассчитывают R_f (коэффициенты распределения) по формуле:

R_f = Х_i / Х₀,

где Х₀ – расстояние от линии старта до линии форонта растворителя, Х_i- расстояние от линии старта до середины пятна (рис. 1).

Сопоставляя величины R_f аминокислот-свидетелей и аминокислот исследуемой смеси, делают заключение о природе аминокислот в составе смеси.